基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟

• 作者: 孙远明 杨武英 杨金易 沈玉栋 王弘 肖治理 董洁娴 谢曦 邓龙
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 克百威 单链抗体 分子对接 定点突变 亲和力成熟
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 生物化学
• 页码范围: 2486-2491
• 页数: 6页
• 分类号: O629
• 字数: 3266字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7503/cjcu20120308

摘要

为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋内亲水氨基酸残基HArg40和LHis38进行模拟替换,再进行分子对接分析,发现当以亮氨酸为突变氨基酸时,对接评分最高.在此基础上,通过构建突变scFv基因及可溶性表达,采用ELISA法对进化后的单链抗体(evoscFv)进行了鉴定.结果表明,evoscFv对CBF的IC50值为18.11 μg/L,低于野生型抗体的27.25 μg/L,亲和解离常数Kd为4.06×10-8 mol/L,相对亲和力比野生型scFv提高了2.23倍,说明通过分子对接分析及对抗体活性口袋中氨基酸残基进行替换,获得了一个亲和力更高的突变体抗体.