抗TSLP全人源单链抗体的体外亲和力成熟

• 作者: 先德群 叶迎春 年四季 徐文峰 袁青
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗TSLP-scFv 全人源单链抗体 分子对接 亲和力
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1301-1305
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11|R786
• 字数: 3714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.005

摘要

目的:对抗TSLP-scFv全人源单链抗体进行单点突变,以提高其亲和力.方法:本研究前期筛选了特异性好的抗TSLP-scFv,本研究利用Discovery Studio系统模拟TSLP和抗TSLP-scFv 三维结构,进行分子对接,对结合表位氨基酸进行随机突变,选取可显著提高其亲和力的氨基酸突变点,根据突变位点设计引物,采用重叠延伸PCR对氨基酸位点进行突变.将突变后的scFv基因与表达载体pLZ16连接,转化E.coli DH5αF′,表达后筛选亲和力提高的抗TSLP-scFv.结果:DS系统筛选出可以提高scFv亲和力的5个单点突变氨基酸位点,PCR扩增出突变后的抗TSLP-scFv DNA片段大小为1 000 bp左右.将测序正确的菌株进行表达,通过ELISA筛选出与抗原结合力提升的抗TSLP-scFv;通过生物大分子相互作用技术,测定单抗的亲和力,突变后的scFv M4亲和力较突变前提高了10倍左右.结论:成功提升了抗TSLP-scFv全人源单链抗体的亲和力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	年四季	西南医科大学基础医学院	4	19	2.0	4.0
2	袁青	西南医科大学药学院药理学教研室	4	0	0.0	0.0
3	徐文峰	西南医科大学基础医学院	2	0	0.0	0.0
4	先德群	西南医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
5	叶迎春	西南医科大学基础医学院	3	17	1.0	3.0