高亲和力抗Met人源基因工程抗体scFv的筛选与特性分析

• 作者: 冯振卿 曹伯良 朱进 焦永军 王辛 管晓虹
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 抗Met单链抗体 亲和力成熟 抗肿瘤
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 417-422
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2006.06.004

摘要

目的: 应用噬菌体展示技术制备抗HGF受体Met特异性、高亲和力的全人抗体scFv片段.方法: 以从天然抗体库中筛选出的Fab基因可变区VH和VL为模板,分别在CDR区引入有限突变和随机突变,扩增出scFv基因库,克隆于pComb3XSS中,构建scFv次级突变抗体库,筛选高亲和力克隆.结果: 经5轮细胞筛选和2轮抗原固相筛选,选取60个克隆进行ELISA检测,选择较高亲和力的噬菌体抗体,克隆于原核表达载体pBAD-gIII/A中,经诱导表达、SDS-PAGE和Western blotting分析,在相对分子质量30 000处出现预期大小的蛋白条带.单链抗体经表达、变性与复性和IMAC亲和纯化后,用于流式细胞术、免疫沉淀分析,结果表明,scFv能够与S114细胞表达Met的胞外区特异性结合,其亲和常数Kd 值为4.76×10-8mol/L,与突变前抗体的亲和力( Kd值为5.24×10-6mol/L)相比,抗体的亲和力提高约100倍.竞争ELISA结果显示,亲和力成熟后抗体的抗原结合表位未变.结论: 经过CDR突变和抗体库筛选,有效提高了抗体的亲和力,该抗体有望成为临床肿瘤诊断或治疗的候选分子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯振卿	南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室	140	833	14.0	21.0
2	管晓虹	南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室	58	333	10.0	15.0
3	曹伯良	南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室	8	19	2.0	4.0
4	焦永军	南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室	5	23	4.0	4.0
5	王辛	南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室	1	7	1.0	1.0