抗甲硝唑人源scFv抗体筛选与鉴定

• 作者: 刘雪林 向丹 宋宏彬 宫立众 沈建良 臧丽梅 马巍娜 黄友章
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体表面展示技术 甲硝唑 人源单链可变区
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 7-10
• 分类号: R392.11
• 字数: 4036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.04.003

摘要

目的 筛选甲硝唑人源单链可变区(scFv)抗体,为研究快速检测试剂盒奠定基础.方法 采用噬菌体表面展示技术,以甲硝唑作为抗原,固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选抗甲硝唑的90个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与甲硝唑结合活性较强的scFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定SfiⅠ/NotⅠ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XL1-Blue,提取质粒进行酶切鉴定分析.结果 经过筛选90个克隆中有16株克隆ELISA的490 nm波长吸光度(A490nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清清蛋白(BSA)进行交叉反应,确定有4株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌感受态细胞XL1-Blue.结论 提取质粒酶切片段与目的相符,为下一步研究其特异性亲和力的研究创造了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄友章	中国人民解放军海军总医院血液科	23	38	3.0	5.0
2	马巍娜	中国人民解放军海军总医院血液科	11	33	3.0	5.0
3	刘雪林	中国人民解放军军事医学科学院十所	18	158	6.0	12.0
4	宋宏彬	中国人民解放军军事医学科学院十所	19	76	6.0	8.0
5	沈建良	中国人民解放军海军总医院血液科	17	22	2.0	4.0
6	宫立众	中国人民解放军海军总医院血液科	9	9	2.0	2.0
7	向丹	中国人民解放军海军总医院血液科	8	6	2.0	2.0
8	臧丽梅	中国人民解放军海军总医院血液科	2	3	1.0	1.0