银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析

• 作者: 刘云华 周秋虎 常振战 张灵芝
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 银胶菊(Parthenium argentatum) 丙二烯氧化物合成酶 细胞色素P450 表达纯化 酶活性分析
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 76-82
• 分类号: Q492.4
• 字数: 4318字
• 语种: 中文

摘要

植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈.探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法.氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆茵中应表达为水溶性蛋白质.试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不合去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的7酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云华	黑龙江生态工程职业学院生物技术系	6	33	2.0	5.0
5	周秋虎	北京大学基础医学院生物物理系	1	1	1.0	1.0
6	张灵芝	北京大学药学院天然药物学系	2	1	1.0	1.0
7	常振战	北京大学基础医学院生物物理系	3	4	1.0	2.0