MIF活性区域相互作用蛋白的筛选

• 作者: 丁红 罗琼 肖定璋 陈少贤 陈景 黄曙方
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞移动抑制因子 巯基蛋白质氧化还原酶 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用 硫氧还蛋白样蛋白2
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1861-1867
• 分类号: R363.2
• 字数: 6750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.10.024

摘要

目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白.方法:采用酵母双杂交系统进行筛选.首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化 TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选.通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认.结果:分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌.HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化 TPOR活性片段相互作用的蛋白.将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同.结论:TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白.本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗琼	广东省人民医院广东省医学科学院血液科	7	16	3.0	3.0
2	肖定璋		1	2	1.0	1.0
3	陈少贤		1	2	1.0	1.0
4	陈景		1	2	1.0	1.0
5	黄曙方		1	2	1.0	1.0