HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响

• 作者: 何松 罗娜 罗莉 郭进军 雷宇 龚倩
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: HBV X蛋白 cccDNA 前基因组RNA 定点突变技术
• 年，卷（期）: 2012,（13）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1259-1264
• 分类号: R394-33|R394.3|R373.21
• 语种: 中文

摘要

目的 构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响.方法 以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定.用Sap Ⅰ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTM Reagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中.在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot 和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录.结果 在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围.两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P＞0.05).而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50％～70％ (P＜0.05).结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何松	重庆医科大学附属第二医院消化内科	83	507	13.0	19.0
2	罗莉	重庆医科大学附属第二医院消化内科	13	66	4.0	8.0
3	郭进军	重庆医科大学附属第二医院消化内科	18	99	5.0	9.0
4	雷宇	重庆医科大学病毒性肝炎研究所	19	66	4.0	8.0
5	罗娜	重庆医科大学附属第二医院消化内科	9	27	4.0	4.0
6	龚倩	重庆医科大学附属第二医院消化内科	3	4	1.0	2.0