慢病毒介导的人Bax基因和人肝细胞生长因子基因在小鼠胚胎成纤维细胞中的共表达

• 作者: 常青 徐平 李珂 高洪波
• 来源期刊: 中华临床医师杂志（电子版）
• 关键词: 慢病毒属 肝细胞生长因子 bcl-2相关X蛋白质 冠状动脉旁路移植术,非体外循环 NIH3T3细胞
• 年，卷（期）: 2012,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7547-7551
• 页数: 5页
• 字数: 4303字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2012.23.013

摘要

目的 构建绿色荧光蛋白标记的人Bax基因(hBax)和人肝细胞生长因子基因(hHGF)双基因共表达的重组慢病毒.证实已包装成功的慢病毒能感染正常细胞并表达目的 蛋白.方法 通过重叠PCR技术构建attB1-K-hBAX/T2A/eGFP/P2A/hHGF-attB2基因片段,利用gateway technology构建慢病毒载体质粒pLV.EX2d.null-EF1A>hBAX/T2A/eGFP/P2A/hHGF和阴性对照质粒pLV.EX2d.null-EF1A>eGFP并测序,上述两种质粒分别与辅助质粒共转染293FT细胞包装病毒,荧光显微镜检测病毒滴度.实验分为实验组(感染了共表达Bax和HGF的慢病毒)、阴性对照组(仅感染了表达绿色荧光的慢病毒)和空白组(未作任何处理的正常NIH3T3细胞)三组,RT-PCR和Western blot检测染毒后各组细胞Bax和HGF的表达.结果经鉴定慢病毒载体质粒构建正确,荧光显微镜检测hBax和hHGF共表达慢病毒滴度为7.8×107 TU/ml,仅表达绿色荧光蛋白的阴性病毒滴度为9×107 TU/ml.将包装成功的慢病毒感染NIH3T3细胞48 h后,RT-PCR和Western blot结果显示实验组与其他两组相比,Bax和HGF的表达明显上调(P<0.05).结论 标记增强型绿色荧光蛋白的表达hBax和hHGF双基因慢病毒构建成功并获得高滴度的病毒感染液.通过慢病毒感染途径成功将HGF和Bax基因导入NIH3T3细胞并表达蛋白,为进一步研究Bax和HGF双基因共表达的重组慢病毒对血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的影响奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐平	青岛大学医学院附属医院心外科	88	242	8.0	12.0
2	常青	青岛大学医学院附属医院心外科	38	95	6.0	8.0
3	高洪波	青岛大学医学院附属医院心外科	21	41	3.0	5.0
4	李珂	青岛阜外心血管病医院心脏中心	3	11	2.0	3.0