家兔C型利钠肽基因真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张剑 朱宇 李临海 欧阳一鸣 王昆华 肖乐 黄映光 龙亚新 龚昆梅
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 利钠肽,C型 质粒 克隆,分子 基因疗法 兔
• 年，卷（期）: 2012,（27）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2796-2798,封2
• 分类号: R4
• 字数: 2533字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2012.27.002

摘要

目的 为开展C型利钠肽(CNP)基因治疗构建家兔CNP基因真核表达载体.方法 通过RT-PCR从家兔腹主动脉组织中克隆CNP基因全长编码区,将该DNA片段亚克隆至克隆载体pMD 18-T中,用Pst Ⅰ单酶切筛选出负向插入片段,用Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ双酶切将目的DNA片段定向克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,然后用双酶切、DNA序列测定鉴定方法对重组质粒进行鉴定.结果 酶切及测序鉴定证实,家兔CNP基因全长编码区被准确插入到pEGFP-N1酶切位点Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ中.结论 含家兔CNP基因真核表达载体的成功构建和鉴定为CNP基因治疗的研究奠定了基础.