兔支气管败血波氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 刘燕 姚火春 季权安 肖琛闻 钱微 韦强 鲍国连
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 兔支气管败血波氏杆菌 CyaA 荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 技术改进
• 页码范围: 498-504
• 页数: 7页
• 字数: 4354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.04.016

摘要

为了建立特异、敏感、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以Bb的毒力因子CyaA为目的基因设计特异性引物和探针,并将PCR扩增产物克隆测序,测序结果与GenBank上Bb的CyaA的同源性达100％.以阳性克隆质粒作为定量检测标准品建立标准曲线,以提取的Bb基因组DNA为模板,进行特异性、灵敏度和重复性实验.该方法对波氏杆菌基因组DNA检测最低限为0.32 pg,灵敏度是普通PCR的25倍,与临床常见细菌无交叉反应.对45份疑似感染兔波氏杆菌病料的检测表明,TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为75.6％和66.7％,两者符合率88.2％.结果表明,建立的TaqMan荧光定量Bb检测方法具有较好的特异性、敏感性和重复性.该方法的建立对Bb的临床高效诊断,Bb的防控提供了有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚火春	南京农业大学动物医学学院	90	614	11.0	23.0
2	韦强	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	64	394	10.0	17.0
3	鲍国连	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	67	410	11.0	17.0
4	季权安	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	61	360	10.0	16.0
5	刘燕	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	43	210	7.0	12.0
6	肖琛闻	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	37	101	5.0	7.0
7	钱微	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	2	18	2.0	2.0