1种高效纳米抗体生产方法的建立

• 作者: 付向晶 刘海金 刘阳坤 慕国辉 杜恩岐 杨增岐 王兴龙 贺生芳
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳米抗体 融合标签 自剪切Intein 表达纯化 双抗夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1487-1493
• 页数: 7页
• 分类号: Q789
• 字数: 4245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.09.022

摘要

为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2) Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb (His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb (His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体.分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体.且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性.结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高.融合蛋白经pH7、25℃剪切24 h后可以得到不含融合标签的纳米抗体.双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2 Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P＞0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的.本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体.为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨增岐	西北农林科技大学动物医学院	113	812	16.0	23.0
2	王兴龙	西北农林科技大学动物医学院	25	40	3.0	5.0
3	杜恩岐	西北农林科技大学动物医学院	11	94	4.0	9.0
4	刘海金	西北农林科技大学动物医学院	3	2	1.0	1.0
5	刘阳坤	西北农林科技大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
6	贺生芳	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
7	付向晶	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
8	慕国辉	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0