巢式-重叠PCR构建金属还原酶基因缺失片段

• 作者: 吴翠娇 喻娜娜 牛倩倩 王斌 赵巍
• 来源期刊: 青岛大学医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 曲霉菌属 聚合酶链反应 氧化还原酶类
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 196-198,201
• 页数: 4页
• 分类号: R379.6|Q756
• 语种: 中文
• DOI: 10.11712/qdyxy201303003

摘要

目的 利用重叠PCR构建敲除烟曲霉金属还原酶基因所需的融合片段,并检测巢式PCR对重叠PCR的影响.方法 比对烟曲霉金属还原酶基因上下游的同源性,在其同源性较好的区域设计引物,扩增出金属还原酶基因上下游片段.同时,利用PCR获得潮霉素抗性标记基因的两个片段.再通过巢式PCR将基因上下游片段与相应的标记基因片段分别连接,获得转化所需的融合片段.获得的融合片段用凝胶电泳和测序进行鉴定.结果 获得的融合片段经凝胶电泳检测大小正确.经测序鉴定证实融合片段正确连接并与理论序列有很高的一致性.与常规重叠PCR相比,巢式PCR的引入减少了杂带量.结论 获得构建金属还原酶基因缺失所需的融合片段,为实现烟曲霉金属还原酶基因的敲除与功能研究奠定基础.巢式-重叠PCR可以提高产物的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴翠娇		20	41	4.0	5.0
2	王斌		240	1129	17.0	23.0
3	赵巍		16	21	4.0	4.0
4	喻娜娜		3	9	2.0	3.0
5	牛倩倩		3	5	1.0	2.0