玫瑰链霉菌海藻糖合成酶基因克隆、表达及功能鉴定

• 作者: 李雪 杜丽琴 林芳 梁甲元 雷攀先 韦宇拓 黄日波 黄英
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 玫瑰链霉菌 海藻糖合成酶 克隆表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 4195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2013.01.004

摘要

目的:克隆玫瑰链霉菌海藻糖合成酶基因(Srt)使其在大肠杆菌XL10-Gold中高效表达,并对重组酶的酶学特性进行研究.方法:利用PCR技术从玫瑰链霉菌中克隆到一段长1 704bp的海藻糖合成酶基因(Srt),构建重组表达质粒pSE380-Sft-treS,将其转化大肠杆菌XL10-Gold中诱导表达,对重组纯酶进行SDS-PAGE分析及酶学特性测定.结果:SDS-PAGE显示在65kDa处有明显单一蛋白条带.该酶可催化麦芽糖和海藻糖之间的可逆反应,海藻糖得率达82％,且含有很低的副产物葡萄糖(5％左右).最适反应温度和pH分别为30℃、7.5,Cu2+、Zn2+和Tris能明显抑制酶活力.该酶还可催化蔗糖生成一种无龋齿,适合糖尿病患者食用的糖类-海藻酮糖.结论:成功克隆表达了一个海藻糖合成酶基因,该酶转化率高,副产物较少,为工业酶法生产海藻糖奠定基础.