纤维微菌海藻糖合成酶基因克隆表达及酶学特性鉴定

• 作者: 刘滔滔 张宏涛 曹磊 杜丽琴 梁智群 谢敏 韦宇拓
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 海藻糖合成酶 纤维微菌 反向PCR 酶学性质
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物学
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 4423字
• 语种: 中文

摘要

[目的]开发适用于海藻糖生产的新型海藻糖合成酶.[方法]通过反向PCR技术,从一株纤维微菌的基因组DNA中获知海藻糖合成酶基因完整ORF序列,进而克隆得到纤维微菌海藻糖合成酶基因(CCTreS),将其与表达载体pSE380构建重组质粒后转入大肠杆菌BL-21 (DE3)中诱导表达,通过镍柱亲和层析纯化得到纯酶并进行酶学性质测定.[结果]从纤维微菌中克隆并在大肠杆菌中成功表达海藻糖合成酶基因(CCTreS).经纯化获得的重组酶(CCTreS)在以麦芽糖为底物生成海藻糖时,最适反应pH值为7.0,最适反应温度为45℃,40℃保温lh仍具有80％以上的相对酶活力,在pH值5.5～8.5保存24 h,相对酶活力仍保留80％以上.Cu2+对其有明显抑制作用.[结论]该重组酶具有很好的热稳定性和pH稳定性,具有一定的研究价值和潜在的工业应用价值.