人神经营养素3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 傅强 沈翠华 袁健东 郎俊哲
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人神经营养素3 慢病毒载体 基因转染
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 351-354
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2642字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带人神经营养素3 (hNT3)基因的重组慢病毒表达载体.方法:通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGC-E1-hNT3-EGFP质粒,将该质粒转化大肠杆菌DH5α,通过PCR、酶切、测序和对比验证hNT3,通过Lipofectamine 2000将pGC-E1-hNT3-EGFP、pHe1per 1.0和pHe1per 2.0三质粒系统共转染293T细胞包装病毒,经大量扩增后,应用实时定量PCR法鉴定和测定滴度.结果:克隆得到512 bp目的hNT3全长基因,经过PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实,hNT3基因成功克隆到慢病毒载体中,可实现hNT3基因的表达,且病毒滴度为5×107 TU/L.结论:成功构建表达人hNT3基因的慢病毒载体并能在293T细胞中扩增获得足够高的病毒滴度,可作为基因转染的有效工具在将来神经损伤修复实验研究中得到应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅强	第二军医大学附属长海医院骨科	97	1069	17.0	27.0
2	沈翠华	温州医学院附属第一医院骨科	10	57	5.0	7.0
3	袁健东	温州医学院附属第一医院骨科	11	39	4.0	5.0
4	郎俊哲	温州医学院附属第一医院骨科	2	9	1.0	2.0