应用基因敲除快速构建大肠杆菌突变体改造脂肪酸代谢途径

• 作者: 刘伟丰 刘翠花 曲璟秋 朱坤 陶勇
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 Red同源重组 P1噬菌体 基因敲除 脂肪酸含量
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 方法
• 页码范围: 608-614
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

[目的]基因敲除技术是研究基因功能的重要手段.我们试图建立一种快速、高效的大肠杆菌基因敲除方法.[方法]利用大肠杆菌(Escherichia coli) BW25113单基因缺失体Keio文库,将经典的Red同源重组技术与P1噬菌体转导技术相结合,对E.coli MG1655脂肪酸代谢基因进行快速敲除.[结果]获得了大肠杆菌β-氧化途径的缺失菌株△fadD、△fadE和△fadD-△fadE；脂肪酸合成途径缺失菌株△fabH、△fabF和△fabH-△fabF.敲除fadD和fadE对生长情况没有影响；敲除fabH后,生长速度明显减慢；敲除fabF对生长几乎没有影响.FadD、FadE及双敲缺失体的脂肪酸含量18.2 mg/L、20.0mg/L和19.2 mg/L,略高于野生型17.5 mg/L;FabH、FabF及双敲缺失体的含量分别为12.6 mg/L、15.2 mg/L和11.2 mg/L,明显低于野生型.[结论]在单基因突变体文库基础上,利用P1噬菌体转导、Red同源重组和抗性基因消除进行基因敲除,简化了构建大肠杆菌单基因和多重突变体的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟丰	中国科学院微生物研究所	24	264	8.0	16.0
2	陶勇	中国科学院微生物研究所	49	311	9.0	16.0
3	刘翠花	中国科学院微生物研究所	2	22	2.0	2.0
4	曲璟秋	中国科学院微生物研究所	2	16	2.0	2.0
5	朱坤	中国科学院微生物研究所	2	16	2.0	2.0