双重实时荧光定量PCR检测产志贺毒素大肠埃希菌Stx1和stx2基因

• 作者: 刘凯 刘学通 孟琼 熊衍文 白向宁 赵爱兰
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产志贺毒素大肠埃希菌 实时荧光定量聚合酶链反应 志贺毒素
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 241-244
• 页数: 4页
• 分类号: R446.5
• 字数: 3268字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法.方法 根据stx1和stx2及其变种序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度和特异性评价,并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行检测分析.结果 双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的灵敏度为1×102 copies/反应体系；该法对17种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对47株不同志贺毒素类型及变种的已知STEC菌株的检测特异性为100％；对模拟粪便标本的检测下限为3.55×103 CFU/g;对动物粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养.结论 建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同志贺毒素类型及变种的STEC菌株的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本和动物粪便标本STEC感染的快速筛查.