SP-B中间产物特异性抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘伟 常立文 徐洪涛 李文斌 杨慧 王席娟 蔡保欢 袁文浩 赵玲霞
• 来源期刊: 华南国防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 多克隆抗体 表面活性物质蛋白B 中间产物 制备与鉴定
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 447-450,463
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2595.2013.07.001

摘要

目的 制备和鉴定表面活性物质蛋白B (surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体.方法 利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前血清背景和免疫后血清效价,抗原亲和纯化抗血清,超滤浓缩抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blot)鉴定抗体特异性.结果 免疫前兔血清背景均低,免疫后抗血清效价均达到要求,抗原亲和纯化后所得抗体纯度及效价高,特异性好.结论 成功制备了3种SP-B中间产物特异性多克隆抗体,为深入研究SP-B的加工处理奠定了基础.