番鸭呼肠孤病毒YB株σB蛋白的基因序列分析及其原核表达

• 作者: 吴宝成 吴异健 吴晓平 张红星 王劭 韩典霖 黄一帆
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番鸭呼肠孤病毒 σB蛋白 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 185-191
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,DRV)是造成雏番鸭高死亡率的重要病原体,深入其检测与免疫研究对于防控DRV感染意义重大.利用RT-PCR和测序技术,对3株福建DRV分离株的S3基因进行序列分析,发现DRV-YH、YJL株与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)遗传距离较近,同源性高达94.6％～98.9％,而DRV-YB株与ARV同源性仅为60.6％～61.7％.构建和鉴定DRV YB株重组原核表达质粒pET-30a-S3,并转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE表明,表达的目的蛋白分子量约为42ku,IPTG最适诱导浓度为0.1mM,最适诱导时间为5h,最适诱导温度为37℃,以包涵体形式存在.薄层扫描显示重组DRV σB蛋白占菌体总量的67.7％.以Ni2+柱亲和层析纯化蛋白,纯化后的目的蛋白纯度为93％,质量浓度为0.86g/L.Western blot分析该融合蛋白能与抗DRV阳性血清发生特异性反应,表明重组DRV σB蛋白具有良好的免疫反应性.