HIV-1 p24基因的克隆构建及对中国仓鼠卵巢细胞毒性的初步研究

• 作者: 吴南屏 姚航平 陈亮
• 来源期刊: 国际流行病学传染病学杂志
• 关键词: HIV-1 P24蛋白 基因表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 102-105,封3
• 页数: 5页
• 字数: 2641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4149.2013.02.008

摘要

目的 在大肠埃希菌(E.coli)及中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达HIV-1 P24抗原,并在体外观察P24蛋白对CHO细胞的毒性作用.方法 利用RT-PCR技术扩增从HIV-1感染者外周血中提取的p24抗原基因,p24基因经HindⅢ、EcoR Ⅰ酶切后插入pEGFP-C2,转染CHO细胞,观察绿荧光蛋白的表达.同时p24基因经HindⅢXhoⅠ酶切后插入表达载体pET24a,转化E.coli BL21 (DE3),经WTG诱导,表达P24抗原.运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用免疫印迹法及ELISA法对表达产物的纯度和抗原性进行检测.提纯重组蛋白P24,加入CHO细胞培养液中,观察其对CHO细胞的毒性作用.结果 转染CHO细胞2h绿色荧光蛋白表达最高,培养上清P24蛋白浓度15 ng/L.随时间延长绿荧光逐渐减少,8h后荧光消失,细胞全部死亡.在E.coli BL21中p24基因可获高效表达.在CHO细胞培养液中加入重组蛋白P24,细胞逐渐死亡.结论 构建了HIV-1 p24表达载体pEGFP-C2-p24,在CHO细胞中能瞬时表达.构建了HIV-1 p24表达载体pET24a-p24,在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性.重组蛋白P24在体外对CHO细胞具有毒性,可能参与了HIV-1的致病机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈亮	北京积水潭医院感染病科	24	35	3.0	5.0