兔抗鸡碱性氨基酸转运载体b0,+AT多克隆抗体的制备及其效价和特异性分析

• 作者: 冯定远 夏伟光 孙育平 左建军 甘鲁飞
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 碱性氨基酸转运载体 b0,+AT 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 1025-1036
• 页数: 12页
• 分类号: S831|S852.2
• 字数: 10129字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2013.05.018

摘要

为了获得兔抗鸡碱性氨基酸转运载体b0,+AT多克隆抗体,并对多克隆抗体进行特异性分析,本试验利用鸡b0,+ AT cDNA全序列(GenBank登录号HQ338713)进行生物信息学分析,预测其蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构及抗原表位,并设计出1段抗原多肽；构建鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒,原核表达融合蛋白经纯化后,注射于新西兰大白兔,经3次加强免疫后,制备兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,并采用酶联免疫分析(ELISA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术分析其效价和特异性.结果如下:1)鸡肠道b0,+AT分子质量为53.8 ku,等电点为8.27,编码493个氨基酸,其中含33个强碱性氨基酸残基(K、R)、28个强酸性氨基酸残基(D、E)、235个疏水性氨基酸残基(A、I、L、F、W、V)、122个极性氨基酸残基(N、C、Q、S、T、Y)；经推测,b0,+AT有12个跨膜螺旋结构,由32.05％α-螺旋、25.96％延伸链和41.99％无规则卷曲组成.2)成功构建了鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒并获得兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,抗体效价可达到1∶204 800,且特异性较好.3)利用制备的兔抗鸡b 0,+AT多克隆抗体作为一抗,肠道组织膜蛋白为抗原,采用Western blot验证获得预期的特异性条带,一抗稀释比例为1∶4 000.结果提示,本试验成功制备了与膜蛋白b0,+AT特异性较好的多克隆抗体,同时其在鸡肠道组织中具有较好的应用效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯定远	华南农业大学动物科学学院	260	2501	23.0	39.0
2	左建军	华南农业大学动物科学学院	84	367	10.0	14.0
3	夏伟光	华南农业大学动物科学学院	3	9	1.0	3.0
4	孙育平	华南农业大学动物科学学院	2	1	1.0	1.0
5	甘鲁飞	华南农业大学动物科学学院	1	0	0.0	0.0