SMB-1型金属β-内酰胺酶的原核表达及酶活性研究

• 作者: 宋金春 彭燕 李荣凌 沈秉正
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: SMB-1金属β-内酰胺酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 439-442
• 页数: 4页
• 分类号: Q556+.4
• 字数: 2955字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8783.2013.04.023

摘要

目的 原核表达SMB-1型金属β-内酰胺酶,并研究其水解β-内酰胺类抗生素的活性.方法利用化学合成方法合成blaSMB-1基因,经PCR扩增后克隆至pET28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28a-SMB-1,转化至E.coli BL21(DE3),诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,测定其水解底物时的酶促反应动力学参数及最适pH值和温度.结果重组质粒经测序证明其正确性;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,纯化后蛋白的质量浓度为0.20 mg/mL,该酶对本实验中除氨曲南外的所有β-内酰胺类抗生素均具有较高水解活性,其最适pH值为8.0,最适温度为40 ℃.结论 利用工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28a-SMB-1成功实现了SMB-1型金属β-内酰胺酶的原核表达,为深入研究其生物学功能及作用机制提供了物质基础,同时也为研发该酶的抑制剂提供了靶标物质.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋金春	武汉大学人民医院药学部	279	1734	20.0	27.0
2	李荣凌	武汉大学人民医院药学部	43	244	9.0	13.0
3	彭燕	武汉大学人民医院药学部	73	320	11.0	14.0
4	沈秉正	武汉大学人民医院药学部	29	80	5.0	8.0