靶向CK18的shRNA表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

• 作者: 师锐赞 胡晓玲 范彦英 许华
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 角蛋白18 短发夹RNA 真核表达载体 乳腺癌 MCF-7细胞
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 348-351
• 分类号: R737.9|R730.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.03.016

摘要

目的:构建靶向人角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)基因的shRNA真核表达载体,稳定转染人乳腺癌MCF-7细胞株,观察其对MCF-7细胞增殖的影响.方法:设计两条靶向CK18基因的RNA干扰序列,命名为CK18-shRNA1、CK18-shRNA2,同时设计阴性对照,将合成的寡核苷酸链与Psilencer3.1-H1/Hygro质粒连接形成重组质粒,并经脂质体介导稳定转染MCF-7细胞,G418筛选后扩增获得稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞株中CK18 mRNA和蛋白的表达,并进一步通过MTT法检测重组表达载体稳定转染对细胞增殖的影响.结果:重组表达载体(Psilencer3.1-CK18-shRNA1、Psilencer3.1-CK18-shRNA2和Psilencer3.1-NC-shRNA)经PCR及DNA测序分析证明序列插入正确,经500 μg/ml G418筛选出稳定转染Psilencer3.1-CK18-shRNA的MCF-7细胞,Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞中CK18 mRNA和蛋白的表达,而Psilencer3.1-CK18-shRNA1转染不影响MCF-7细胞中CK18 mRNA和蛋白的表达水平.与阴性对照Psilencer3.1-NC-shRNA组相比,Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞的增殖[(0.40±0.01)vs(0.55 ±0.06),P＜0.05].结论:靶向CK18的shRNA表达载体稳定转染细胞后可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	师锐赞	山西医科大学药理教研室	19	53	4.0	6.0
2	胡晓玲	山西医科大学药理教研室	10	30	3.0	5.0
3	范彦英	山西医科大学药理教研室	11	26	3.0	3.0
4	许华	山西医科大学药理教研室	2	10	2.0	2.0