H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用

• 作者: 姜秀云 张月娥 李国新 李泽君 李雪松 滕巧泱 申伟霞 胡涛 闫丽萍
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: H9N2 禽流感病毒 定量PCR 敏感性
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4108字
• 语种: 中文

摘要

H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）是我国主要流行的低致病性禽流感病毒亚型，因而对其进行病毒的监测与诊断显得极其重要。通过比对GenBank上H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了一个特异性针对H9 AIV HA的探针。特异性和扩增曲线实验结果显示，该探针具有较好的扩增效率，且仅特异性识别H9亚型AIV。通过重组质粒pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板，进行荧光定量PCR。实验结果表明，本研究所建立的荧光定量PCR方法敏感性能达到100个DNA拷贝数，比传统PCR方法检测敏感性提高了1000倍。此外，本方法还能检测到10EID50个病毒，比传统PCR方法检测敏感性也提高了1000倍。通过批间和批内试验，结果表明，这两个试验的变异系数分别小于5%和1%，说明本研究的方法具有较好的重复性。此外，通过检测人工感染动物咽拭子，结果表明H9亚型AIV荧光定量PCR方法比传统PCR的方法检测敏感性提高了100倍。在临床样品的检测中，H9亚型AIV荧光定量PCR方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了大约30%。综上所述，本研究所建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确性和敏感性，对H9亚型禽流感疫情防控及其流行病学调查具有积极的科学意义。