胰酶-EDTA差速消化法纯化原代培养的汗腺细胞

• 作者: 付小兵 孙同柱 张翠萍 谭志军 赵换军 赵洪良 陈艳 马奎
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 关键词: 胰酶-EDTA汗腺 分离 纯化 成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 225-227,前插2
• 页数: 4页
• 字数: 2412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2013.04.011

摘要

目的:探讨胰酶-EDTA差速消化法纯化原代培养的汗腺细胞的效果.方法:取新鲜的腹部手术患者腹部皮肤,D-Hanks液浸洗去除皮肤中的血液,剪成1 mm×1 mm大小的皮粒,将剪碎的皮粒放入装有5 ml (2 mg/ml) 的Ⅱ型胶原酶的培养皿中,置于37 ℃、5%CO2孵箱中消化8~12 h,倒置相差显微镜直视下吸取游离的汗腺,用汗腺培养基培养5~7 d,观察细胞形态和生长状况,加入胰酶-EDTA混合溶液2 ml(胰蛋白酶0.25,EDTA 0.53 mol/L)消化3 min,成纤维细胞收缩变圆后立即加入胎牛血清5 ml终止消化,吸弃消化液,D-Hanks冲洗2~3次,加入5 ml含10%胎牛血清DMEM培养液继续培养.镜下观察成纤维细胞去除效果,并对纯化后的细胞进行免疫细胞化学鉴定.结果:汗腺分离培养5~7 d后,汗腺细胞呈铺路石样生长,并且汗腺细胞周围生长有大量的成纤维细胞;用胰酶-EDTA消化3 min后,细胞计数显示约有95%以上的成纤维细胞被去除;免疫细胞化学鉴定结果显示纯化后的细胞CEA和CK8染色阳性,而波形蛋白和成纤维细胞特异性蛋白染色阴性.结论:胰酶-EDTA差速消化法能够简单、快速、高效地纯化汗腺细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙同柱	解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室	57	562	14.0	20.0
2	张翠萍	解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室	27	126	7.0	8.0
3	马奎	解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室	14	81	6.0	8.0
4	谭志军		6	16	2.0	4.0
5	陈艳		11	219	7.0	11.0
6	赵洪良		3	14	2.0	3.0
7	赵换军		3	14	2.0	3.0