ART-PCR方法的建立及扩增低拷贝RNA的初步研究

• 作者: 周宋峰 朱远源 李铁军 陆毅祥
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 依赖反义RNA的核糖核酸酶T1 PCR 低拷贝 高拷贝 基因 RNase T1 dsRNA ssRNA 病毒
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 475-479
• 页数: 5页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文

摘要

建立依赖反义RNA和核糖核酸酶T1(RNase T1)的PCR方法,称为ART-PCR,用于扩增高拷贝RNA和复杂RNA样本中的低拷贝RNA.首先,设计待检低拷贝RNA的反义RNA分子,在高拷贝和复杂RNA样本中与待检低拷贝RNA退火后用RNase T1消化,反转录后用PCR扩增.进一步,用ARPE-19细胞中低表达基因干扰素γ(IFNG)作为实例,用ART-PCR和常规实时定量PCR(RT-qPCR)检测.结果显示,用ART-PCR可以很好地消除常规RT-qPCR中低拷贝RNA的PCR抑制效应.研究结果初步表明ART-PCR可以作为检测低拷贝RNA的理想工具,这对于RNA功能的基础研究以及基于多重PCR的临床复合病毒感染的基因诊断方法的优化、推广具有重要的参考价值.