巢氏PCR扩增低拷贝HBV全基因组方法的建立及应用

• 作者: 周华君 孙长贵 张孟 成军 戴玉柱 李倩
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 低拷贝 全基因 巢式聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 44-49
• 页数: 6页
• 分类号: R512.62|Q503
• 字数: 4298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2018.03.013

摘要

目的 建立一种用于低拷贝乙型肝炎病毒(HBV)不同基因型全基因组扩增的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法及应用评价.方法 通过设计和改良一组对HBV各基因型(A,B,C,D,E,F,G) DNA均具有较高扩增效率的通用巢式简并引物,采用两步法分六段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增低拷贝HBV基因组,比较不同反应条件对于PCR扩增产物的影响(退火温度,引物浓度),建立一种适合于低拷贝HBV全基因组扩增的方法;同时采用该方法对57份低浓度HB-sAg乙肝感染者(HBsAg＜10IU/ml)的全基因组进行扩增、测序、拼接并进行评价.结果 该方法的灵敏度可达25IU/ml,重复性好,对57份低浓度HBsAg乙肝感染者进行扩增,其中全基因扩增49例(86.0％),各片段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增分别为:53例(93.0％),52例(91.2％),54例(94.7％),54例(94.7％),55例(96.5％)和49例(86.0％),说明该方法适用于慢性低浓度HBsAg乙肝感染者HBV DNA全基因扩增.结论 该文为慢性低浓度HBsAg乙肝感染者的全基因系列分析提供了高灵敏度、高特异度的方法,可在低浓度HBsAg感染者流行病学调查中发挥重要作用,同时为巢氏PCR扩增反应体系的优化提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李倩	中国人民解放军第一一七医院检验科	108	891	13.0	28.0
2	成军	中国人民解放军第一一七医院检验科	83	902	16.0	28.0
3	孙长贵	中国人民解放军第一一七医院检验科	23	104	6.0	9.0
4	张孟	中国人民解放军第一一七医院财经中心	8	20	2.0	4.0
5	周华君	中国人民解放军第一一七医院检验科	1	1	1.0	1.0
6	戴玉柱	中国人民解放军第一一七医院检验科	2	1	1.0	1.0