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同源区段长度对 In-Fusion 技术连接效率的影响
同源区段长度对 In-Fusion 技术连接效率的影响
作者:
朱平
李慧仙
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
定向分子进化
In-Fusion技术
同源区段
高通量克隆
摘要:
目的在目的基因原载体(DNA 模板)与克隆载体相同的条件下,探讨了 PCR 扩增片段(含目的基因)的末端与载体间同源区段长度对 In-Fusion 连接效率的影响,并建立以In-Fusion 技术为基础的高通量克隆方法。方法以糖基水解酶 Lxyl-p1-2(2.4 kb)基因突变库的构建为例,设计引物使目的基因的两端分别与线性化载体末端含有15~200 bp 重叠序列,并通过易错 PCR 方法获得含目的基因的 PCR 扩增片段,运用 In-Fusion 技术将 PCR 扩增片段定向克隆至表达载体 pPIC3.5K 中。结果对于长度大约为2.4 kb 的较大片段 DNA 的克隆, PCR 扩增片段的末端与载体间最适同源区段长度约为100 bp,此时连接效率最高,其阳性重组率高达90%左右,是常规酶切连接法的3倍。与后者相比,该技术将克隆周期由3~4 d 缩短为1~2 d。结论优化的同源区段长度可以显著提高 In-Fusion 技术对于2.4 kb 目的基因与载体的连接效率,该方法尤其适用于定向进化过程中基因突变库的构建。
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篇名
同源区段长度对 In-Fusion 技术连接效率的影响
来源期刊
中国医药生物技术
学科
关键词
定向分子进化
In-Fusion技术
同源区段
高通量克隆
年,卷(期)
2013,(4)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
241-246
页数
6页
分类号
字数
3844字
语种
中文
DOI
10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.04.001
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高通量克隆
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
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期刊影响力
中国医药生物技术
主办单位:
中国医药生物技术协会
出版周期:
双月刊
ISSN:
1673-713X
CN:
11-5512/R
开本:
大16开
出版地:
北京市天坛西里1号
邮发代号:
创刊时间:
2006
语种:
chi
出版文献量(篇)
1998
总下载数(次)
2
总被引数(次)
5232
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