供体同源臂长度对 ZFN 介导的同源重组效率的影响

• 作者: 乔艳乐 何祖勇 聂宇 陈瑶生
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 锌指核酸酶 DNA 双链断裂 同源重组 供体 同源臂
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 100-107
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 4641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13471/j.cnki.acta.snus.2016.04.017

摘要

应用锌指核酸酶（Zinc Finger Nuclease，ZFN）和序列同源的供体（Donor）作为模板，借助 DNA 的同源重组修复机制能够对动物基因组实现精确的遗传修饰。目前关于供体长度与 ZFN 介导的同源重组修复效率相关性的报道相对较少。本研究构建了一对靶向 EGFP 的 ZFN 并鉴定了活性，同时设计了一系列不同长度的供体，应用流式细胞分析术，在稳定整合了带有移码突变的 EGFP 基因的 CHO 细胞中系统分析了供体长度对 ZFN 介导的同源重组修复效率的影响。结果发现当同源臂单臂仅有50 bp 时，即可有效支持 ZFN 介导的同源同组，随着同源臂长度的延伸，同源重组的效率有所提高，但要实现高效率的同源重组（较传统方法提高104倍），同源臂单臂长度需要延长至1000 bp 以上。这为今后如何设计合适的 Donor，以提高 ZFN 等基因组编辑工具介导的同源重组效率提供了借鉴。