用Red介导的同源重组结合酶切改构质粒DNA

• 作者: 于梅 周建光 李山虎 陈伟
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 缺失突变 DNA,单链 寡核苷酸类
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 241-243
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2005.03.011

摘要

目的:用Red介导的单链寡核苷酸体内同源重组结合限制酶切方法对pBR322-Red质粒中的DNA序列进行精确的缺失突变.方法:用合成的单链寡核苷酸打靶分子电击转化W3110(pBR322-Red)宿主菌,利用Red提供的同源重组功能敲除从kil基因至N基因长约2 100 bp的DNA序列,并用kil-N序列中含有的单一酶切位点XhoⅠ对混合质粒进行酶切,取酶切产物转化W3110感受态细胞,菌落PCR方法筛选重组阳性克隆.结果:在没有任何筛选标记的情况下,用菌落PCR方法从10个菌落中成功挑选出1个重组阳性克隆.结论:该方法操作简单、精确,能够避免引入新突变,为DNA序列的缺失突变提供了一种新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周建光	军事医学科学院生物工程研究所	74	296	8.0	14.0
2	陈伟		76	243	9.0	12.0
3	李山虎	军事医学科学院生物工程研究所	27	69	5.0	6.0
4	于梅	军事医学科学院生物工程研究所	7	43	4.0	6.0