猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

• 作者: 侯怡轩 刘光清 吴玉璐 周艳君 王康 程群 童光志 虞凌雪
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 ORF3基因 RT-PCR 鉴别诊断
• 年，卷（期）: 2013,（20）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 4370-4377
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.20.021

摘要

[目的]利用RT-PCR技术建立一种在临床上便于区分猪流行性腹泻病毒（PEDV）自然感染与疫苗免疫毒株的方法。[方法]根据GenBank公布的PEDV ORF3基因序列，在其存在基因缺失区两端的保守区域设计特异性引物，对近两年采集的仔猪腹泻样品进行检测，分析流行毒株的ORF3基因，选择部分阳性样品利用鉴定引物进行RT-PCR扩增，优化其反应体系、Tm值等条件，进行鉴别诊断方法的特异性、敏感性试验，并对大量临床样品进行检测验证。[结果]从新发仔猪腹泻临床样品中克隆获得了11株PEDV的ORF3基因，序列分析显示新分离的9株ORF3基因不存在缺失，属于自然感染野毒，其与疫苗株的核苷酸同源性为95.8%-97.1%。建立的鉴别诊断方法可以特异性扩增PEDV的ORF3基因，其中获得的PEDV自然感染毒株基因片段大小约300 bp ，而弱毒疫苗株则为250 bp左右；该鉴别诊断方法与其他猪源病毒无交叉扩增，其敏感性可达到100TCID 50/0.1mL，对仔猪腹泻临床样品检测结果显示，PEDV自然感染的阳性率为65.4%。[结论]初步建立了基于PEDV ORF3基因的RT-PCR鉴别诊断方法，该方法可以用于区分自然感染的野毒和弱毒疫苗免疫毒株，为PEDV的疫情诊断和流行病学监测提供了一种特异、快速的检测方法。