切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备

• 作者: 任晓丽 张华堂 张芳 王文举 田长富 罗得华 罗沈强
• 来源期刊: 昆明医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋氨酸酶GST标签 多抗制备
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: R730.54
• 字数: 3000字
• 语种: 中文

摘要

目的 优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法 将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Met)的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1∶128,间接Elisa法测效价1∶1×105.结果 成功表达纯化出纯度大于90％的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论 所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.