猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析

• 作者: 朱小丽 朱晓琳 李兆龙 林锋强 江斌 王劭 程晓霞 陈仕龙 陈少莺
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 猪 传染性胃肠炎病毒(TGEV) TGEV-福建(Fujian)分离株 核衣壳蛋白 N基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 112-119
• 页数: 8页
• 字数: 4921字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.01.014

摘要

猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病.为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株N基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株N基因全长1 149 bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4％～99.8％,氨基酸同源性为96.1％～100％.TGEV-FJ株N基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichiac oli)Rosetta(DE3)中进行表达.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白约为68 kD,与预期分子量一致;Western blot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Sus scrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果.利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原.TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料.