弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5诱导小鼠免疫应答的研究

• 作者: 周松林 林映莹 范志刚 谭光宏 赵焕阁 黄用豪 黄风迎
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 复合基因疫苗 SAG1-ROP5
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文

摘要

目的 观察弓形虫复合基因疫苗pcSAG 1-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答.方法 构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAG1、pcROP5和pcSAG1-ROP5,分别通过PCR、酶切和测序鉴定后,转染人宫颈癌细胞(HeLa细胞),蛋白印迹(Western blotting)分析重组蛋白的体外表达情况.70只昆明小鼠随机均分为5组(每组14只),分别为pcSAG1组、pcROP5组、pcSAG1-ROP5组、空质粒组和空白对照组.重组质粒组每次每只肌注100 μg重组质粒,每2周免疫1次,共3次.空质粒组和空白对照组分别注射等量的空质粒和PBS.于每次免疫前和末次免疫后2周眼眶采血,制备血清.采用ELISA法检测pcSAG1-ROP5组小鼠末次免疫后2周的血清与重组蛋白SAG1、ROP5和SAG1-ROP5结合的效价,以及5组小鼠的各次血清中抗弓形虫抗体IgG水平.末次免疫后3周,每组小鼠取10只腹腔接种103弓形虫速殖子,观察生存时间.末次免疫后4周,采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平. 结果 重组真核表达质粒构建成功.Western blotting分析结果显示,重组质粒pcSAG1、pcROP5和pcSAG1-ROP5均能在HeLa细胞中表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)分别为31 000、57 000和88 000.pcSAG1-ROP5组小鼠血清与重组蛋白SAG1、ROP5和SAG1-ROP5结合的效价分别为1∶320、1∶160和1∶2560.3个重组质粒组小鼠血清抗弓形虫IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间的延长逐渐升高,末次免疫后2周,pcSAG1-ROP5组小鼠血清IgG抗体水平(0.612±0.031)显著高于其他各组(P＜0.05).攻击感染后,pcSAG1-ROP5组小鼠的平均存活时间为(288±7)h,较pcSAG1组和pcROP5组分别延长了48 h和96 h(P＜0.05).末次免疫后4周,pcSAG1-ROP5组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ水平[(908.52±6.31) pg/ml]显著高于其他各组(P＜0.05),各组的IL-4水平差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 与弓形虫单基因疫苗pcSAG1和pcROP5相比,复合基因疫苗pcSAG1-ROP5所诱导的抗弓形虫IgG抗体和IFN-γ水平较高,攻击感染后存活时间延长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭光宏	海南医学院海南省热带病重点实验室	43	127	8.0	9.0
2	黄风迎	海南医学院海南省热带病重点实验室	26	48	4.0	5.0
3	范志刚	海南医学院海南省热带病重点实验室	33	77	5.0	7.0
4	赵焕阁	海南医学院海南省热带病重点实验室	17	38	3.0	5.0
5	林映莹	海南医学院海南省热带病重点实验室	17	38	3.0	5.0
6	周松林	海南医学院海南省热带病重点实验室	20	61	4.0	7.0
7	黄用豪	海南医学院海南省热带病重点实验室	25	52	3.0	6.0