创伤弧菌PMA RTi-PCR检测技术的建立

• 作者: 吴新伟 周勇 张晶 陶霞
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 创伤弧菌 PMA RTi-PCR 死活细菌
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 54-58
• 页数: 5页
• 分类号: R378.3
• 字数: 2917字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.01.012

摘要

目的 将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时定量聚合酶链式反应(RTi-PCR)技术相结合,建立以一种快速准确的创伤弧菌检测方法.方法 以vvh基因作为检测创伤弧菌的靶基因,用PMA对样品基因组提取进行前处理,抑制该DNA分子的RTi-PCR扩增.结果 终浓度为3.0 mg/L的PMA可有效抑制死细胞(1×108 CFU/mL)DNA的扩增;当PMA浓度小于或等于5.0 mg/L时,对创伤弧菌DNA的扩增没有显著的影响;含有不同比例死活细菌的创伤弧菌混合液RTi-PCR结果表明,PMA RTi-PCR能选择性定量创伤弧菌中的活菌.纯培养创伤弧菌活细胞的检测灵敏度检测极限为2.5×101 CFU/mL,并且Ct值与细胞数的对数呈良好的线性关系,相关系数R2值为0.9982.结论 PMA RTi-PCR是一种快速灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴新伟	广州市疾病预防控制中心微生物检验科	55	475	11.0	19.0
2	周勇	广州市疾病预防控制中心微生物检验科	25	123	7.0	9.0
3	陶霞	广州市疾病预防控制中心微生物检验科	14	79	5.0	8.0
4	张晶	广州市疾病预防控制中心微生物检验科	17	102	6.0	10.0