定点突变FGF21提高表达量研究

• 作者: 任桂萍 刘明瑶 曹荣邱 李德山 高华山
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: FGF21 定点突变 表达量 促进葡萄糖吸收活性
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 83-88
• 页数: 6页
• 分类号: Q816|Q785
• 字数: 4565字
• 语种: 中文

摘要

FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物.但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量.以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21；在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白.利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性.结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达；与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50％.Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应.糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高华山	东北农业大学生命科学学院	4	4	1.0	2.0
2	任桂萍	东北农业大学生命科学学院	62	253	8.0	13.0
3	李德山	东北农业大学生命科学学院	66	240	8.0	13.0
4	曹荣邱	东北农业大学生命科学学院	1	4	1.0	1.0
5	刘明瑶	东北农业大学生命科学学院	2	4	1.0	2.0