膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备

• 作者: 张佳诗 张正坤 徐文静 时圣凤 李小宇 李忠鹏 王永志 路扬 高旭东
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 膦丝菌素乙酰转移酶 bar基因 蛋白表达 活性 抗体制备
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 500-503
• 分类号: R392.121|S41|Q876
• 语种: 中文

摘要

目的 表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb).方法 通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21 (DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性.免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞.结果 在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb.结论 表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究.