降钙素原的原核表达及单克隆抗体制备

• 作者: 何赛 刘如石 吴意 廖晶 张坚松 李晓丹 梁湘辉 邱义兰 郑姣 郭向荣
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙素原 原核表达 酶联免疫吸附 (ELISA) 纯化 单克隆抗体 (mAb)
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 147-155
• 页数: 9页
• 分类号: R392
• 字数: 7043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2016.02.009

摘要

目的：高效表达与纯化可溶性重组人PCT蛋白，制备高灵敏度和高特异性的抗人PCT医用诊断单克隆抗体。方法：大肠杆菌表达重组人PCT蛋白后，利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化PCT蛋白后，经质谱、Western blot和间接 ELISA法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性；重组蛋白免疫小鼠，经细胞融合及筛选制备抗PCT单克隆抗体（mAb）。结果：在大肠杆菌中高效表达了人PCT蛋白；重组人PCT蛋白具有良好的免疫反应性与免疫原性；经筛选获得7株抗PCT单克隆抗体细胞株，经ELISA鉴定，筛选抗体可与PCT抗原有良好的特异性反应。结论：利用重组人PCT蛋白免疫制备了抗人PCT单克隆抗体，为进一步研发PCT快速诊断试剂提供了原料。