人降钙素原的原核表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 刘卿 卢叶 吴亮 姜旭淦 汪慧 陈盛霞
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙素原 细胞融合 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 242-247
• 页数: 6页
• 分类号: R392-33
• 字数: 4494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y190024

摘要

目的:原核表达人降钙素原(procalcitonin,PCT)重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体.方法:将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定.获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次.将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体,经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化.结果:SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量约14 kDa处有一明显条带,与目的蛋白大小相符.蛋白质印迹法和胶体金法证明该可溶性蛋白为PCT.采用细胞融合技术成功筛选出7株阳性杂交瘤细胞,将其命名为B3,C4,C7,E9,F8,F10,G2.选B3和C4细胞株通过体内诱生法制备单克隆抗体,经纯化后纯度可达95％ 以上.间接ELISA法检测B3、C4抗体效价均可达107,亲和常数分别为5.06×108,7.3×108.结论:获得高纯度的PCT重组蛋白及其单克隆抗体,为PCT检测试剂盒的进一步研究提供了支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈盛霞	江苏大学医学院	48	347	13.0	16.0
2	姜旭淦	江苏大学医学院	48	252	10.0	14.0
3	吴亮	江苏大学医学院	51	245	11.0	15.0
4	刘卿	江苏大学医学院	2	1	1.0	1.0
5	汪慧	江苏大学医学院	4	4	1.0	2.0
6	卢叶	江苏大学医学院	2	0	0.0	0.0