咪唑啉受体抗血清选择性蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备

• 作者: 从玉文 刘莹 孙启鸿 李锦 柳晓兰 王勃
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 咪唑啉受体抗血清选择性蛋白 单克隆抗体 蛋白质表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 423-426
• 页数: 4页
• 分类号: Q813.2
• 字数: 4467字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2007.05.006

摘要

目的:表达和纯化咪唑啉受体抗血清选择性蛋白(imidazoline receptor antiserum-selected protein,IRAS protein),制备IRAS蛋白的单克隆抗体.方法:采用基因重组技术在大肠杆菌表达IRAS蛋白;金属镍螯合的Ni-NTA亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株;以间接ELISA方法筛选分泌特异性IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞;采用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光方法鉴定单克隆抗体的特异性.结果:成功表达并纯化了IRAS重组蛋白,纯度达到95%.共筛选出5株分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了IRAS的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体效价分别为1∶ 8×106,1∶ 2×106和1∶ 5×106,属于IgG1亚型.该抗体能与原核及真核系统表达的IRAS重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光显示IRAS蛋白主要定位于细胞质中.结论:建立了稳定分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,成功制备了特异性好的IRAS单克隆抗体,为研究IRAS的功能提供了有力的研究工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳晓兰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	35	164	6.0	11.0
2	李锦	军事医学科学院毒物药物研究所	117	391	11.0	13.0
3	从玉文	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	54	469	13.0	20.0
4	刘莹	军事医学科学院毒物药物研究所	15	18	2.0	4.0
5	孙启鸿	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	17	117	6.0	10.0
6	王勃	军事医学科学院毒物药物研究所	11	18	2.0	3.0