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树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化
树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化
作者:
李国平
涂萍
满永
王抒
王艳
黎健
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
树鼬
载脂蛋白AV
原核表达
蛋白纯化
His标签
摘要:
目的 构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白.方法 从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,扩增载脂蛋白AV基因.PCR扩增产物和pET32a原核表达载体经过双酶切,将纯化回收的酶切产物按适当的摩尔比通过T4 DNA连接酶16℃连接过夜,连接产物转化大肠杆菌感受态细胞Top10,挑克隆测序.将克隆成功的载脂蛋白AV重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,并优化诱导条件.表达的载脂蛋白AV经镍离子螯合树脂纯化,采用BCA法分析蛋白浓度,纯度测l定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合薄膜凝胶扫描分析获得.结果 挑选的克隆经测序证实载脂蛋白AV基因已经成功连接入pET32a原核表达载体中.在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,有分子量大小约60 kDa的特异性蛋白产生,与预期大小一致.重组蛋白诱导的最佳表达时间为5h左右,最佳浓度约在20 μmol/L.镍离子螯合树脂柱亲和层析获得的纯化蛋白,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳后薄膜凝胶扫描分析显示目的蛋白的纯度在95%以上.结论 成功构建了载脂蛋白AV的原核表达载体,该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达,纯化后的载脂蛋白AV纯度约95%,为进一步研究其结构与功能奠定了基础.
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文献信息
篇名
树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化
来源期刊
中国动脉硬化杂志
学科
生物学
关键词
树鼬
载脂蛋白AV
原核表达
蛋白纯化
His标签
年,卷(期)
2013,(9)
所属期刊栏目
实验研究
研究方向
页码范围
775-779
页数
分类号
Q71
字数
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
王抒
卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室
58
836
15.0
27.0
2
满永
卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室
17
168
6.0
12.0
3
黎健
卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部
37
375
10.0
18.0
4
涂萍
南昌市第三医院内分泌代谢科
33
158
7.0
11.0
5
王艳
南昌市第三医院内分泌代谢科
6
10
1.0
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李国平
卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室
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树鼬
载脂蛋白AV
原核表达
蛋白纯化
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研究来源
研究分支
研究去脉
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相关学者/机构
期刊影响力
中国动脉硬化杂志
主办单位:
中国病理生理学会
南华大学
出版周期:
月刊
ISSN:
1007-3949
CN:
43-1262/R
开本:
大16开
出版地:
湖南省衡阳市南华大学
邮发代号:
42-165
创刊时间:
1993
语种:
chi
出版文献量(篇)
5032
总下载数(次)
9
总被引数(次)
41212
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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中国动脉硬化杂志2013年第11期
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