来源于葡萄球菌的N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因克隆及性质

• 作者: 冯进辉 吴洽庆 周传华 朱敦明 肖冬光 陈曦
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 葡萄球菌 N-乙酰神经氨酸裂合酶 表达 纯化 生物催化
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 480-489
• 语种: 中文

摘要

葡萄球菌Staphylococcus hominis来源的N-乙酰神经氨酸裂合酶基因shnal(GenBank Accession No.EFS20452.1)构建至pET-28a质粒并在大肠杆菌中得到表达.通过目的蛋白的纯化和酶学性质研究发现,ShNAL是一个四聚体,裂解方向的最适反应pH为8.0；合成方向的最适反应pH为7.5,最适反应温度为45℃.在45℃下孵育2h对ShNAL的活力基本无影响,高于45℃时,活力迅速下降.该酶在pH 5.0～10.0的环境中比较稳定,4℃下放置24 h酶的残余活力在70％以上.ShNAL对N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、N-乙酰甘露糖胺(Man)和丙酮酸(Pyr)的Km值分别是(4.0±0.2) mmol/L、(131.7±12.1)mmol/L和(35.14±3.2) mmol/L,kcat/Km值分别为1.9 L/(mmol·s)、0.08 L/(mmol·s)和0.08 L/(mmol·s).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈曦	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	248	4761	35.0	57.0
2	肖冬光	天津科技大学生物工程学院	196	1254	18.0	26.0
3	吴洽庆	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	14	63	4.0	7.0
4	冯进辉	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	5	4	1.0	1.0
5	周传华	天津科技大学生物工程学院	13	88	5.0	9.0