miR-338-3p对神经母细胞瘤增殖和侵袭的抑制作用

• 作者: 张虹 董蒨 郝希伟 陈鑫 韩芦芦 鹿洪亭
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 神经母细胞瘤 细胞增殖 微RNAs
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 524-528
• 页数: 5页
• 字数: 4167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2013.07.012

摘要

目的 探讨microRNA-338-3p(miR-338-3p)对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和SK-N-MC增殖、侵袭和迁移能力的影响,miR靶基因的确定及靶基因功能的研究.方法 miRNA芯片结果发现miR在神经母细胞瘤中低表达,利用实时定量PCR验证其结果.利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-338-3p mimics和miR-338-3p的反义寡核苷酸链(ASO)以及对照质粒分别瞬时转染SK-N-SH和SK-N-MC两种细胞系,MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的体外侵袭和迁移能力.利用生物信息学技术预测miR-338-3p的靶基因,并应用EGFP荧光报告载体实验,实时荧光定量PCR和Western blot实验对靶基因进行验证.并利用实时定量PCR检测神经母细胞瘤中靶基因的表达.最后,将靶基因的敲降质粒和过表达质粒以及对照空质粒分别瞬时转染细胞,MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验来检测细胞的体外侵袭和迁移能力.结果 实时定量PCR显示与癌旁正常组织相比,miR-338-3p在神经母细胞瘤细胞中低表达(P＜0.01)；癌细胞转染miR-338-3p mimics后,细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是减弱的(P＜0.01),而在转染了miR-338-3p的ASO封闭miR-338-3p的表达后,细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是增强的(P＜0.01).利用生物信息学方法将RAB14基因作为miR-338-3p的候选靶基因,EGFP荧光报告载体实验显示过表达miR-338-3p可以抑制含有miR-338-3p结合位点的报告载体的荧光量(P＜0.01),而将结合位点的碱基进行突变后miR-338-3p对靶基因3'UTR的抑制作用则消失.实时荧光定量PCR和Western blot结果表明过表达miR-338-3p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制RAB14的表达(P＜0.01),而用ASO抑制miR-338-3p的表达后RAB14的水平升高(P＜0.01).实时定量PCR结果显示靶基因RAB14在神经母细胞瘤中呈现高表达(P＜0.01).最后,癌细胞转染敲降RAB14的质粒pSilencer/shR-RAB14后,细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力降低(P＜0.01),而过表达靶基因RAB14后,细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力增强(P＜0.01).结论 RAB14是miR-338-3p的直接靶基因,miR-338-3p通过抑制RAB14的表达而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖及侵袭和迁移能力.