不对称还原大位阻二芳香基甲酮的羰基还原酶的基因克隆及性质分析

• 作者: 刘卫东 吴洽庆 朱敦明 李哲 贾士儒 陈曦 马延和
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 生物催化 二芳香基甲酮 羰基还原酶 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 68-77
• 语种: 中文

摘要

由于二芳香基甲酮的位阻大及羰基两侧的取代基差异性较小,对其进行不对称还原是生物催化中具有挑战性的难题之一.文中通过对毕赤酵母GSl15基因组序列的分析,发现了一个潜在羰基还原酶基因pascr.将该基因克隆、表达在大肠杆菌Rosetta2 (DE3)中,通过Ni-NTA对重组蛋白进行了分离纯化,并对酶的性质进行了研究.PasCR专一性利用NADPH作为辅酶,其最适反应pH为6.5；最适反应温度为35℃；凝胶层析实验结合SDS-PAGE分析表明PasCR在溶液中以二聚体形式存在.PasCR能够不对称还原位阻较大的二芳香基甲酮类化合物,如4-甲基二苯甲酮、4-氯二苯甲酮、2-氯二苯甲酮等,对4-甲基二苯甲酮的还原产物的ee值达到了85％.