猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 信爱国 孙强 宋建领 李华春 王娟 高华峰
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 荧光定量PCR DNA标准品
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 疾病防治
• 页码范围: 71-74
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2614字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank登录的猪肺炎支原体黏附素P97基因(U50901)序列,设计l对特异性引物和1条探针,优化了猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法.25 μL反应体系,引物MhpF/MhpR (20 μmol/L)各0.5 μL,探针MhpP(20 μmol/L)0.5 μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的10g值之间的线性相关系数为0.997.特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异地检测猪肺炎支原体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒,猪细小病毒、猪圆环病毒等病原检测无交叉反应;针对猪肺炎支原体阳性质粒标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数在0.78％～ 1.16％之间.用建立的实时荧光定量PCR检测方法,对40份临床样品检测,结果表明肺脏拭子与肺脏悬液阳性率完全一致,而鼻腔拭子检出率较低.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋建领		27	214	9.0	13.0
2	李华春		11	34	4.0	5.0
3	高华峰		14	73	6.0	8.0
4	信爱国		10	93	5.0	9.0
5	孙强		3	6	1.0	2.0
6	王娟		1	5	1.0	1.0