甘草酸单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 吴婷婷 孙慧 孙晔 屈会化 张越 李翼飞 王庆国 薛瑾 赵琰
• 来源期刊: 药物分析杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甘草酸 单克隆抗体 制备 鉴定 杂交瘤细胞株 免疫亲和色谱柱 酶联免疫吸附法
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 生物检定·活性分析
• 页码范围: 770-774
• 页数: 5页
• 分类号: R917
• 语种: 中文

摘要

目的:制备特异性的甘草酸(GA)单克隆抗体.方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测.结果:获得了稳定分泌抗甘草酸的单克隆抗体杂交瘤细胞株GA-Mab-DF5,腹水抗体纯化后纯度达98％,回收率达80％.线性检测范围为4～ 64 μg·mL-1,R2 =0.9986,并且与BSA、明胶、胆酸、去氧胆酸、芍药苷、黄芩苷等无交叉反应.结论:成功获得能稳定分泌甘草酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,灵敏度、特异性均较高,为样品中甘草酸的快速微量检测及免疫亲和色谱柱制备奠定了基础.