浙贝母土壤真菌DNA提取方法的优化

• 作者: 刘文洪 宋皓军 袁小凤 路京
• 来源期刊: 浙江中医药大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 浙贝母 根际土壤 DNA提取 巢式PCR 变性凝胶梯度电泳
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 中药研究
• 页码范围: 69-73
• 页数: 5页
• 分类号: R282.71
• 字数: 3659字
• 语种: 中文

摘要

[目的]由于土壤理化性质的复杂性和真菌细胞壁结构的特殊性,从土壤样品中提取真菌基因组DNA往往比较困难,本实验通过方法优化以寻找适合浙贝母土壤真菌DNA的最佳方法.[方法]分别采用传统玻璃珠法,Ultra CleanTM土壤DNA提取试剂盒法及改进的试剂盒法等3种方法,提取宁波浙贝母种植区的根际土壤微生物总DNA,利用巢式PCR扩增真菌DNA片段.[结果]3种方法均可提取土壤微生物总DNA.其中改进的试剂盒法提取的DNA电泳结果条带最清晰,试剂盒法提取的DNA电泳结果次之,传统玻璃珠法提取的DNA电泳条带不清晰,且有拖尾.对上述三种方法所提取的DNA做巢式PCR分析真菌特异性,传统方法电泳无目的条带,试剂盒法只有第一次PCR电泳有目的条带,只有改进的UltracleanTM土壤DNA提取试剂盒法最终获得了350 bp左右的目的条带,而且利用变性凝胶梯度电泳技术(Denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)成功地检测到不同种源以及根际与非根际土中微生物的差异.因此认为改进的试剂盒法为提取土壤真菌DNA的最优选择.[结论]在土壤真菌DNA提取中,合适的振荡方法是土壤真菌能否破壁的关键性因素.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘文洪		88	348	10.0	14.0
2	路京		3	13	2.0	3.0
3	袁小凤		43	248	9.0	13.0
4	宋皓军		1	6	1.0	1.0