上调c-myc基因的表达对U937白血病细胞的影响

• 作者: 刘玲玲 方志刚 林东军 潘晓娜 范蕊芳 陈家杰 龙梓洁
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: c-Myc蛋白 载体构建 U937细胞
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1984-1989
• 页数: 6页
• 分类号: R733.7
• 字数: 4409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.11.012

摘要

目的:构建稳定表达外源c-myc基因的人单核细胞白血病细胞株U937,并初步分析其特性.方法:首先构建重组质粒MSCV-c-myc-IRES-GFP (MMIG)载体,分别用MMIG及空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)包装病毒,并感染U937细胞,用流式细胞术分选绿色荧光细胞,获得 U937/GFP和U937/MYC细胞,用荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性率,用Western blotting测定细胞中c-Myc、survivin、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Bcl-2的蛋白表达水平,流式细胞术检测U937/GFP和U937/MYC细胞周期,并用MTT法测定U937/GFP和U937/MYC细胞的生长情况,克隆形成实验检测克隆形成能力.结果:荧光显微镜观察,MIG和MMIG病毒感染后,2种细胞均表达绿色荧光蛋白;流式细胞术结果显示,MIG病毒感染的细胞荧光率为26.0%,MMIG病毒感染的细胞荧光率为27.7%;Western blotting的结果显示,c-Myc蛋白在MMIG病毒感染的细胞中表达水平升高.流式细胞术分选后,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达明显增多,U937/GFP和U937/MYC细胞绿色荧光蛋白表达率分别达98.7%和93.7%.U937/MYC细胞中c-Myc蛋白表达较U937/GFP细胞显著升高,c-Myc蛋白下游的survivin表达增多,而凋亡相关蛋白XIAP及Bcl-2的表达则没有明显变化.细胞周期检测显示,U937/MYC细胞处于S期的细胞数增多.MTT实验结果显示,U937/MYC细胞的生长速率较U937/GFP细胞增快.U937/MYC细胞的克隆形成能力较U937/GFP细胞强.结论:成功构建了c-myc基因高表达的U937稳定细胞株U937/MYC.在U937/MYC细胞中,c-Myc及其下游的survivin表达明显上调,处于细胞周期S期的细胞数增多、细胞生长加快、克隆形成能力增强,提示c-Myc可能通过增强自我更新能力、加快细胞周期、促进相关抗凋亡蛋白表达从而提高细胞的存活率.