hTERT和survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用

• 作者: 孙凤祥 王守训 王平 肖琳 董俊红 蒋吉英
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 双靶点RNA干扰 survivin hTERT
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1440-1445
• 页数: 6页
• 分类号: R318.14
• 字数: 3223字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用.方法 根据Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列,构建特异性干扰hTERT基因和survivin基因的重组体pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,酶切、测序鉴定正确后,两个重组体均用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,将pGenesil-1.1-survivin回收大片段,pGenesil-1.2-hTERT回收小片段,将回收大、小片段用T4 DNA连接酶定向连接,即构建成重组体pGenesil1.1-survivin-h TERT.将3个重组体分别转染SW480细胞,RT-PCR检测细胞中hTERT和survivin基因表达水平,MTT检测对SW480细胞增殖的影响.结果 构建的各质粒经限制性酶切及DNA测序均证明其质粒构建正确,RT-PCR检测hTERT和survivin基因表达水平明显降低(P＜0.05),各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).结论 靶向survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功,为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖琳	潍坊医学院生化教研室	8	28	3.0	4.0
2	蒋吉英	潍坊医学院生化教研室	54	186	8.0	10.0
3	王守训	潍坊医学院生化教研室	45	319	10.0	16.0
4	王平	潍坊医学院生化教研室	41	85	6.0	7.0
5	孙凤祥	潍坊医学院生化教研室	19	139	7.0	11.0
6	董俊红	潍坊医学院生化教研室	16	36	3.0	5.0