水牛IFN-γ在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 刘晓乐 姜勇 张策 王冰 胡长敏 谢倩 邹新峰 郭爱珍 陈颖钰
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 水牛 γ干扰素 毕赤酵母 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 71-77
• 页数: 7页
• 分类号: S852.4
• 字数: 6408字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在建立水牛IFN-γ(Bubalus bubalus IFN-γ,Bb IFN-γ)体外释放检测法,为定量检测水牛IFN-γ、开发水牛结核病及其他疫病的检测技术奠定基础.克隆了水牛IFN-γ成熟肽基因片段,根据测序结果,在不改变氨基酸序列的情况下,将密码子替换成毕赤酵母偏爱密码子并合成全基因,进一步用毕赤酵母GS115表达了水牛IFN-γ成熟肽基因.通过水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上检测了其抗病毒活性,抗VSV活性为7.44×105 U/mL.利用酵母表达的水牛IFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,并筛选阳性杂交瘤细胞,获得5株高效价的单克隆抗体.利用该重组蛋白免疫日本长耳大白兔,得到高效价的抗水牛IFN-γ多克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及多克隆抗体建立了检测水牛IFN-γ的双抗体夹心ELISA方法,检测灵敏度达到125 pg/mL.通过建立的方法分别检测了原核表达的奶牛IFN-γ、梅花鹿IFN-γ、弥猴IFN-γ以及其他7种非相关重组蛋白,结果表明所建立的方法灵敏度高,特异性好.